緩沖鹽使用不當(dāng)對(duì)色譜柱的影響及其正確使用方法
在液相色譜分析過程中，常常需要使用緩沖鹽來調(diào)解流動(dòng)相的pH值。緩沖鹽的恰當(dāng)選擇能夠改善分離效果和峰形。若是對(duì)緩沖鹽選擇和使用不當(dāng)，對(duì)色譜柱可能造成一些影響。緩沖鹽使用不當(dāng)對(duì)色譜柱的影響及其正確使用方法
我們可以從柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等方面來分析原因：
（1）柱壓升高；
原因：緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，會(huì)堵塞色譜柱兩端的塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，從而引起柱壓升高。
原因：a）有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；b）凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對(duì)物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
原因：如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化。
在日常實(shí)驗(yàn)中，如何正確使用緩沖鹽呢？使用緩沖鹽時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？
在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的（特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí)）流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的損害。
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相（與分析用流動(dòng)相的區(qū)別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用，要長(zhǎng)期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn)。
