高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測駱駝乳中乳鐵蛋白
乳鐵蛋白是一種可以結(jié)合鐵的糖蛋白，1939 年首次在牛乳中發(fā)現(xiàn)，1960 年由Johannson 從人乳中存在分離培養(yǎng)出來，據(jù)血清轉(zhuǎn)鐵蛋白，轉(zhuǎn)科屬在一起，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白黑色素轉(zhuǎn)鐵蛋白，乳鐵蛋白的分子量大小約為80kDa ，由一條折疊成一個(gè)兩個(gè)球狀裂片的多肽鏈可以組成，能夠通過結(jié)合企業(yè)兩個(gè)鐵原子。
建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，并基于特征肽驗(yàn)證了駱駝乳中乳鐵蛋白的測定方法，駱駝的乳鐵蛋白通過肝素親和層析純化，然后用于篩選胰蛋白酶肽標(biāo)簽。在序列信息數(shù)據(jù)庫可以搜索的基礎(chǔ)上我們選擇一個(gè)特征肽，并通過超高效液相色譜和四極桿飛行活動時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜分析法從純化的駱駝科鐵蛋白的胰蛋白酶水解反應(yīng)產(chǎn)物中進(jìn)行分析鑒定，包括將翼同位素標(biāo)記肽，脂質(zhì)，和酪蛋白處理過的前處理工序，然后用胰蛋白酶消化，分析物在Acquity UPLC BEH 300 C18柱上分離，然后通過在三重四極質(zhì)譜儀上在7分鐘內(nèi)檢測。試驗(yàn)和定量限值分別為3.8毫克公斤-1和11毫克公斤-1。回收率為74.5％-103.6％和低于7.7％的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)用該方法進(jìn)行測定了新疆10個(gè)樣品中乳鐵蛋白的含量。
駱駝奶中提取的駱駝乳鐵蛋白的SDS-PAGE；Lane 1，分子量標(biāo)準(zhǔn)；Lane 2，牛乳乳鐵蛋白；Lane 3，純化駱駝乳鐵蛋白。
